UB系列憑借其充分覆蓋生物納米領(lǐng)域的細(xì)孔設(shè)計(jì)，可以實(shí)現(xiàn)生物納米產(chǎn)品與凝集體等高分子雜質(zhì)的分離。UB-50適用于50 nm以下目標(biāo)的分離純化，UB-100適用于50 nm以上更大尺寸目標(biāo)的分離純化。

我們用這兩根色譜柱來(lái)嘗試分離以下一組混合樣品（進(jìn)樣量為10 μL）：

1. Dextran 5000 (particle size: 460 nm)  10 mg/mL

2. Hemocyanin (particle size: 37 nm)    0.4mg/mL

3. BSA (Particle size: 6 nm)         1.0 mg/mL

當(dāng)使用排阻限為50 nm 的UB-50時(shí)，右旋糖酐 5000的粒徑約460 nm，在UB-50中因?yàn)轶w積大于填料的孔徑，因此與填料沒(méi)有相互作用，在排阻限的位置直接洗脫出來(lái)；而粒徑為37 nm的血藍(lán)蛋白和粒徑為6 nm的牛血清白蛋白在UB-50中得到了比較好的分離，并按照體積從大到小的順序洗脫。而UB-100的孔徑比較大，右旋糖酐5000在色譜柱中與填料發(fā)生相互作用而被保留，按照分子量從大到小逐漸洗脫出來(lái)，表現(xiàn)出展寬的峰；小分子段的血藍(lán)蛋白和牛血清白蛋白在UB-100中雖有分離效果，但分離度沒(méi)有在UB-50中的高。實(shí)際應(yīng)用中，可以根據(jù)樣品的不同尺寸選擇合適的型號(hào)。

以下是分別使用UB-50和UB-100對(duì)生物納米產(chǎn)品分析純化的應(yīng)用實(shí)例。

一、諾如病毒樣顆粒(VLP)的SEC/MALS分析(UB-50)

我們使用生物納米產(chǎn)品分析純化用水溶性SEC(GFC)色譜柱UB-50與各種檢測(cè)器組合，對(duì)來(lái)自細(xì)胞培養(yǎng)上清的諾如病毒VLP進(jìn)行了分析。UV(280 nm)檢測(cè)器用于檢測(cè)培養(yǎng)過(guò)程中產(chǎn)生的全部雜質(zhì)，MALS散射(LS)檢測(cè)器對(duì)納米粒子類(lèi)別的大型目標(biāo)有靈敏度特別高的響應(yīng)。此外，通過(guò)MALS還可以得到目標(biāo)物的旋轉(zhuǎn)半徑(RMS radius)的估計(jì)值。為了更直接地確認(rèn)VLP的形狀、大小等形成情況，我們還使用了透射電子顯微鏡(TEM)進(jìn)行了比較。

- 樣品信息

Sample: 15 μL Norovirus VLP purification grade

- 分析條件

Column：Shodex UB-50 (8.0 mm I.D. x 300 mm)

Eluent：PBS (-)

Flow rate：0.6 mL/min

Detector：UV (280 nm) (small cell volume), MALS (Multi angle light scattering)

Column temp.：Room temp.

- 分析結(jié)果

通過(guò)觀察TEM，可以很好地確認(rèn)VLP的形成情況，而且通過(guò)MALS得到的結(jié)果，大約16分鐘處也確認(rèn)了與TEM相符的粒子大小。盡管這次使用的諾如病毒VLP樣品是純化級(jí)別的，但從RMS半徑的信息中可以看出存在比正常VLP更大的粒子（如凝集體），并且從UV的分析結(jié)果中也暗示了低分子領(lǐng)域仍然殘留有生物源性雜質(zhì)。

UB-50不僅能夠?qū)?0 nm以下的納米產(chǎn)品進(jìn)行分析純化，以實(shí)現(xiàn)目標(biāo)的分析，而且還兼顧了QC中非常重要的產(chǎn)物與生物源性雜質(zhì)的分離。此外，UB-50考慮到了實(shí)驗(yàn)室規(guī)模的制備應(yīng)用，通過(guò)采用26 μm的單分散粒子，實(shí)現(xiàn)了在分析生物源成分的高負(fù)荷工作流程中仍能保持低壓。同時(shí)，UB-50具備高耐堿性，可以用堿清洗，從而提高再現(xiàn)性和減少拖尾效應(yīng)。

二、外泌體的SEC/MALS分析 (UB-100)

我們使用生物納米產(chǎn)品分析純化用水溶性尺寸排阻色譜柱UB-100與各種檢測(cè)器組合，對(duì)來(lái)自人血漿的外泌體(EV)進(jìn)行了分析。UV(280 nm)檢測(cè)器用于檢測(cè)生物源性雜質(zhì)整體，熒光(FL; Ex 280 nm / Em 348 nm)檢測(cè)器主要用于檢測(cè)蛋白質(zhì)（以Trp殘基為指標(biāo)），MALS散射(LS)檢測(cè)器特別對(duì)納米粒子類(lèi)別的大型目標(biāo)產(chǎn)生高靈敏度的響應(yīng)。此外，通過(guò)MALS可以得到目標(biāo)的旋轉(zhuǎn)半徑(RMS radius)的估計(jì)值。

- 樣品信息

Sample: 15 μL Exosome from human plasma purification grade

- 分析條件

Column：Shodex UB-100 (8.0 mm I.D. x 300 mm)

Eluent：PBS (-)

Flow rate：0.6 mL/min

Detector： UV (280 nm) (small cell volume),

      Fluorescence (Ex. 280 nm, Em. 348 nm),  

MALS (Multi angle light scattering)

Column temp.：Room temp.

- 分析結(jié)果

根據(jù)MALS的信息，大約13分鐘附近是以外泌體(EV)為主要組分的區(qū)域，并且從RMS半徑的信息可以推測(cè)分子大小存在分布。本次分析使用的來(lái)自人血漿的EV樣品雖然是純化級(jí)別的，但從UV、FL的分析結(jié)果來(lái)看，在EV區(qū)域之外也檢測(cè)到了峰值，可以推測(cè)仍含有雜質(zhì)。

UB-100不僅能夠?qū)σ酝饷隗w(EV)為主的50 nm以上的納米產(chǎn)品進(jìn)行分析純化，以實(shí)現(xiàn)目標(biāo)的分析，而且還兼顧了QC中非常重要的產(chǎn)物與生物源性雜質(zhì)的分離。此外，UB-100考慮到了實(shí)驗(yàn)室規(guī)模的制備應(yīng)用，通過(guò)采用27 μm的單分散粒子，實(shí)現(xiàn)了在分析生物源成分的高負(fù)荷工作流程中仍能保持低壓。同時(shí)，UB-100具備高耐堿性，可以用堿清洗，從而提高再現(xiàn)性和減少拖尾效應(yīng)。

三、UB系列色譜柱的規(guī)格

[外殼材質(zhì) : SUS]

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